产品货号:
BM0315
中文名称:
DNase I(无RNase活性)
英文名称:
Deoxyribonuclease I,RNase-free
产品规格:
1000U
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本制品是重组表达来源的DNase I (Deoxyribonuclease I),中文名称为脱氧核糖核酸酶I,是一种可消化单链或双链DNA的脱氧核糖核酸内切酶,它识别并切割磷酸二酯键,产生5'端为磷酸基团,3'端为羟基的单脱氧核苷酸或单链或双链的寡脱氧核苷酸。
DNase I的活性依赖于Ca2+,并可被二价金属离子Mg2+、Mn2+等激活。在Mg2+存在的情况下,该酶可随机识别并切割双链DNA任意一条链上的任意位点;而在Mn2?存在的情况下,可识别并切割DNA两条链上几乎相同的位点,产生平末端或有1~2个核苷酸突出的粘末端DNA片段。
- 去除RNA样品中的基因组DNA污染。
- 体外转录:使用RNA聚合酶进行体外转录后,用于模板DNA的去除。
- 用于DNase I足迹法(DNase I footprinting)分析DNA-蛋白质相互作用。
- 与DNA Polymerase I配合使用,用于缺口平移法标记DNA。
- 用于DNA随机片段文库构建。
- 细胞凋亡TUNEL检测中部分剪切基因组DNA作为阳性对照。
1活性单位(U)是指在37℃ 10min能够完全降解1μg pUC19质粒DNA所需要的酶量。
组分 | 规格 |
RNase-free DNase I(1U/μL) | 1mL |
10×DNase I Buffer | 1.25mL |
保存:-20℃
- 蛋白质纯度:使用SDS-PAGE凝胶电泳检测,蛋白纯度不低于95%。
- RNase残留检测:将1U DNase I,RNase-free与500ng总RNA在37℃温育1h,使用琼脂糖凝胶电泳检测超过90%的RNA仍保持完整。
- 进行RNA样品操作时请在RNase-free管中进行加样。
- 在使用本品进行RNA样品中DNA的去除实验时,可在反应体系中添加终浓度1U/μL 重组鼠源RNase抑制剂(货号:BM0304)以保护RNA不被降解。
- DNase I对物理变性敏感,混匀时请勿剧烈振荡。
- 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套及口罩进行实验操作。
- 去除RNA样品中的基因组DNA污染
- 按下表加入各成分配制反应体系:
成分 用量 RNA 1μg 10×DNase I Buffer 1μL RNase-free DNase I(1U/μL) 1μL Nuclease-Free Water 至10μL - 反应条件:37℃ 15min。
- 失活条件:
① 使用加入终浓度5mM EDTA溶液混匀后75℃ 10min进行热失活,EDTA可避免RNA在加热过程中与反应体系中的二价阳离子发生水解。
若进行此步热失活处理,下游RT-PCR或RT-qPCR反应体系中需要额外补加终浓度2.5mM Mg2+,可避免反应体系中过量的EDTA影响下游RT-PCR或RT-qPCR反应。
② 使用柱纯化法或者苯酚/氯仿抽提失活DNase I。
- 按下表加入各成分配制反应体系:
- 体外转录后模板DNA的去除
- 每0.5μg模板DNA的转录反应体系中加入1U DNase I,酶的用量可以根据实际需要优化。
- 反应条件:37℃ 15min。
- 失活条件:柱纯化法或者苯酚/氯仿抽提。
- 每0.5μg模板DNA的转录反应体系中加入1U DNase I,酶的用量可以根据实际需要优化。
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